Главная » 2014»Июнь»24 » Скачать Сравнительное исследование экспрессии и иммунореактивности NMDA рецепторов при экспериментальной церебральной ишемии и геморрагии бесплатно
4:57 PM
Скачать Сравнительное исследование экспрессии и иммунореактивности NMDA рецепторов при экспериментальной церебральной ишемии и геморрагии бесплатно
Сравнительное исследование экспрессии и иммунореактивности NMDA рецепторов при экспериментальной церебральной ишемии и геморрагии мозга
Диссертация
Автор: Гаппоева, Мадина Умаровна
Название: Сравнительное исследование экспрессии и иммунореактивности NMDA рецепторов при экспериментальной церебральной ишемии и геморрагии мозга
Справка: Гаппоева, Мадина Умаровна. Сравнительное исследование экспрессии и иммунореактивности NMDA рецепторов при экспериментальной церебральной ишемии и геморрагии мозга : диссертация кандидата биологических наук : 03.00.04 - Санкт-Петербург, 2003 - Количество страниц: 117 с. ил Санкт-Петербург, 2003 117 c. :
Объем: 117 стр.
Информация: Санкт-Петербург, 2003
Содержание:
ГЛАВА
I Обзор литературы
11 Перспективы молекулярной диагностики в неврологии
12 Нейротоксичность глутамата как один из механизмов инфаркта мозга
13 Ионотропные глутаматные рецепторы один из ключевых биомаркеров ишемии
14 Экспериментальные модели инфаркта мозга
111 Модели глобальной ишемии
112 Модели фокальной ишемии ^ д
143 Модели внутрицеребральной геморрагии
ГЛАВА
II Материалы и методики исследований
1 Экспериментальные модели церебральной ишемии и геморрагии
11 Субтотальная ишемия
12 Фокальная ишемия
13 Церебральная геморрагия
14 Оценка неврологического дефицита у экспериментальных крыс
2 Подготовка образцов мозга и крови для исследования
3 Биохимические методы
4 Методы изучения экспрессии мРНК N M D A рецепторов
5 Иммунохимические методы
6 Методы статистического анализа результатов исследования
ГЛАВА
III Результаты исследования
31 Экспериментальные модели инфаркта мозга: определение объема инфаркта и неврологического дефицита у крыс
32 Изучение экспресии НК2 рецепторов при церебральной ишемии и геморрагии на начальных стадиях образования инфаркта
33 Сравнение иммунореактивности КК2 рецепторов при церебральной ишемии и геморрагии в зоне инфаркта и интакгной области
34 Динамика накопления аутоантител к МК2А и НК2В рецепторам в крови экспериментальных животных
ГЛАВА
IV Обсумедение результатов
ВЫВОДЫ
Введение:
Актуальность проблемы Церебральные инсульты приводят к инвалидности и высокой смертности населения. Они подразделяются на ишемические (80-85 %), происходящие за счет резкого снижения мозгового кровообращения, и геморрагические (15-20 %), вызываемые внутримозговым кровоизлиянием (Toole J.F., 1999). В критических ситуациях точная диагностика типа инсульта жизненно важна для определения терапевтической стратегии, которая существенно различается для ишемии и геморрагии (Скоромец A.A. , Скоромец Т.А., 2002).Исследования последнего десятилетия определили основные механизмы трансформации обратимых гемодинамических, клеточных и молекулярных изменений в стойкий морфологический дефект-инфаркт мозга. Выявление последовательности молекулярных событий, происходящих в ткани мозга, лежащих в основе церебральной ишемии и геморрагии, позволяет разрабатывать новые подходы к ранней диагностике мозговых инсультов и осуществлять поиск новых средств для нейропротективной защиты мозга при нарушениях мозгового кровообращения (Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001).Особую значимость приобретают исследования процессов нейротоксичности глутамата и его рецепторов, приводящих к церебральной ишемии и геморрагии (Meldrum B.S., 2000). Известно, что N M D A рецепторы составляют 80% от количества всех возбуждающих рецепторов и представляют собой гетеромерные пентамеры или тетрамеры NR1 и NR2 субъединиц, формирующих функционально активные каналы.Показано, что устойчивые взаимодействия между клетками связаны с генетической детерминированностью синтеза этих рецепторов в определенных нейронах и теми постоянными или временными функциями, которые они обеспечивают (Saper С В . et a l , 2000).Многолетними исследованиями нашей лаборатории определены ключевые молекулы нейротоксического каскада или аутоантитела к ним, специфично отражающие нарушение метаболизма при ишемии и геморрагии в определенных структурах мозга и коррелирующие с основной симптоматикой заболевания, которые могут быть измерены в биологических жидкостях пациентов и сопоставлены с неврологическими шкалами и данными прижизненной нейровизуализации (Dambinova S.A. et al., 1997, 1998, 2001). На основе этих исследований разработан гемо-тест для определения мозгового кровообращения (НМК-ИФА-набор), который проходит в настоящее время клинические испытания в МЗ РФ (Хунтеев Г А . и др., 2001).Вместе с тем остаются еще не решенными ряд теоретических и практических вопросов, касающихся временных аспектов синтеза, деградации и иммунореактивности N M D A рецепторов в условиях снижения мозгового кровообращения на начальных стадиях. Эти исследования могут быть проведены только у животных на моделях экспериментальной ишемии и геморрагии, у которых можно проследить развитие инфаркта мозга в течение первых минут и часов, что является особенно важным для интенсивной терапии.Известно, что при моделировании процессов глобальной и фокальной ишемии у животных обнаружены противоречивые результаты: экспрессия NR2A субъединицы в СА1 нейронах понижается (Zhang L. et al., 1997), повышается (Perez-Velazquez J.L., Zhang L. , 1994), либо остается неизменной (Pelligrino-Giampietro D.E., et al., 1994). Практически отсутствуют сведения о роли N M D A рецепторов в механизмах церебральной геморрагии (Tang et al., 2001).Цель задачи исследования Целью настоящей работы является изучение свойств глутаматных КМВА рецепторов на начальных стадиях развития инфаркта мозга при экспериментальной церебральной ишемии и геморрагии.Для достижения цели были поставлены следующие задачи: 1. Оценить изменение экспрессии гена МН2А в очаге инфаркта у экспериментальных животных при церебральной ишемии и геморрагии в первые 6 часов операции.2. Изучить иммунореактивность КК2А/2В субъединиц в очаге инфаркта мозга у крыс с церебральной ишемией и геморрагией в первые 6 часов индукции инфаркта, 3. Оценить изменение иммунореактивности ММОА рецепторного комплекса в коре мозга у крыс с церебральной ишемией сроком один месяц после операции.4. Проследить временную динамику накопления аутоантител к NR2A субъединице КМОА-рецептора в крови экспериментальных животных.Научная новизна Показано, что NR2 рецепторы являются основными биомаркерами, способными дифференцировать процессы нейротоксичности, которые лежат в основе молекулярных механизмов церебральной ишемии.Установлены особенности экспрессии гена Ы112А и иммунореактивности N112 подтипов N M D A рецепторов при церебральной ишемии и геморрагии.Выявлены различия между экспрессией гена М112А и иммунореактивностью ]Ж2А рецептора при субтотальной и фокальной ишемии.Показано, что экспрессия гена КК2А рецептора снижена при геморрагии.Обнаружена разная динамика уровня аутоантител к КК2А рецепторам в крови экспериментальных животных с церебральной ишемией и геморрагией.Впервые представлен биохимический профиль возрастания аутоантител к NR2A рецепторам при субтотальной и фокальной ишемии, который позволяет, проводить различия между ишемическими и геморрагическими типами инсульта.На основе вышеуказанных экспериментальных исследований впервые обоснована теоретическая возможность исследования генной экспрессии ключевых биомаркеров нейротоксичности и определения значимости этих показателей для молекулярной (генной) диагностики инсультов.Научно-практическое значение.В настоящее время существуют две основные проблемы в диагностике церебральных инсультов. Первая проблема заключается в своевременной оценке состояния мозга в критических ситуациях и дифференциации типа инсульта: субтотальной, фокальная ишемии или геморрагия для точного выбора стратегии нейропротективной терапии.Второй важной проблемой является доклиническая диагностика с целью выявления группы риска для превентивного лечения. Научнопрактическая ценность настоящей работы заключается в выявлении ключевых биомаркеров нейротоксичности на ранней стадии инсульта. которые позволяют дифференцировать типы инсультов по анализу крови у экспериментальных животных и человека при нарушении мозгового кровообращения. Представленная работа необходима для перспективной разработки экспресс-теста и усовершенствования лабораторной диагностики и контроля за эффективностью лечения церебральных инсультов. Кроме того, она является одним из теоретических обоснований применения в медицинской практике существующего НМК-ИФА-набора для выявления острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, дополняющего существующие методы нейровизуализации и функциональной диагностики.Основные положения диссертации, выносимые на защиту.1. Сравнительное исследование КМОА рецепторов на моделях субтотальной, фокальной ишемии и геморрагии у крыс выявило изменение их синтеза на ранних сроках развития инфаркта мозга, в то время как аутоантитела к ЫМОА рецепторам появлялись в крови к концу первой недели реперфузии и служили биомаркерами в определении типа инсульта при нарушениях мозгового кровообращения.2. Экспрессия гена ЫК2А субъединицы КМОА рецепторов увеличивается в ишемизированной коре и незначительно снижается в гиппокампе при фокальной и субтотальной ишемиях в первые 6 часов ишемии, которая сопровождается снижением иммунореактивности в пораженной инфарктом коре и интактном гиппокампе. Снижение иммунореактивности в мозгу коррелирует с появлением аутоантител к N112 субъединицам КМОА рецепторов в крови у крыс с фокальной и субтотальной ишемией, динамика накопления которых различается у этих моделей.3. Подавление экспрессии гена NR2A субъединицы при церебральной геморрагии не изменяет иммунореактивность этих рецепторов в исследованных структурах мозга. Данные мониторинга аутоантител к NR2 рецепторам в этом случае существенно отличается от церебральной субтотальной и фокальной ишемии и сохраняется на контрольном уровне у ложнооперированных животных.Внедрение в практику результатов исследования Материалы, полученные в настоящей работе, используются в курсах лекций по клинической нейродиагностике и терапии в -Петербургском медицинском университете им. И.П.Павлова, в курсах лабораторной и функциональной диагностики Российского государственного медицинского университета, г. Москва и в курсе лекций по молекулярной нейробиологии в Эмори университете г.Атланта, США. Апробация диссертации. Материалы исследования представлены на III Всерос. медико-биол. конф. молодых исследователей «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2000), конференциях «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, май 2001), «Неврологияиммунология» (Санкт-Петербург, май 2001), симпозиуме "Advances in Molecular Mechanisms of Neurological Disorders" (Perygia, Italy, May 22-25, 2001), Joint Meeting of the ISN and A S N (Buenos Aires, Argentina, August 26-31, 2001), «Нейроиммунология» (Санкт-Петербург, май 2002).Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных публикаций Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текста, состоит из введения, трех глав, обсуждения результатов, выводов, приложения и библиографического указателя использованных литературных источников. Работа проиллюстрирована 13 рисунками и 9 таблицами. Список литературы включает 133 работ, из них 26 - отечественных и 107 зарубежных авторов.
