Главная » 2014»Июнь»26 » Скачать Иммуногенная и протективная активность анатоксина, полученного детоксикацией и инактивацией туберкулезных токсино-аллергенов. бесплатно
1:28 AM
Скачать Иммуногенная и протективная активность анатоксина, полученного детоксикацией и инактивацией туберкулезных токсино-аллергенов. бесплатно
Иммуногенная и протективная активность анатоксина, полученного детоксикацией и инактивацией туберкулезных токсино-аллергенов
Диссертация
Автор: Тимкова, Елена Анатольевна
Название: Иммуногенная и протективная активность анатоксина, полученного детоксикацией и инактивацией туберкулезных токсино-аллергенов
Справка: Тимкова, Елена Анатольевна. Иммуногенная и протективная активность анатоксина, полученного детоксикацией и инактивацией туберкулезных токсино-аллергенов : диссертация кандидата медицинских наук : 14.00.36 / Тимкова Елена Анатольевна; [Место защиты: ГОУВПО "Курский государственный медицинский университет"] Курск, 2005 123 c. :
Объем: 123 стр.
Информация: Курск, 2005
Содержание:
1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
21 Виды микобактерий и их характеристика
22 Особенности и механизмы защиты при туберкулезе
23 Биохимическая характеристика и иммунопротективные свойства фракций микобактерий вакцин
24 Иммунобиологические препараты и механизмы химической инактивации и детоксикации токсино-аллергенов
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
31 Материалы и методы исследований
32 Изыскание синтетических питательных сред для выращивания и выделения микобактерий туберкулеза
33 Сравнительная оценка разных методов деструкции микобактерий туберкулеза для получения растворимых эндотоксино аллергенов
34 Результаты сенсибилизации морских свинок и температурного воздействия на проявление реакций кожи на токсино-аллергены
35 Установление редуцирующего и инактивирующего действия формалина на туберкулезные токсино-аллергены
36 Материалы по получению, изучению протективных и иммуногенных свойств туберкулезного 73 анатоксина
4 Обсуждение результатов исследований
5 Выводы
Введение:
Актуальность темы. Широкое и повсеместное распространение туберкулеза, наличие более 50 видов микобактерий, резкое повышение устойчивости возбудителя к традиционным и новым средствам химио- и антибиотикотерапии, высокий процент смертности представляют серьезную медицинскую и социальную проблему (Перельман М.И., 2001; Коломиец В.М. с соавт. 2002; Ридер Г.А. 2001; Toman. К., 1979).
Во второй половине 80-х годов XX столетия создавалось впечатление, что профессия фтизиатра со дня на день канет в лету и армии борцов с чахоткой придется искать новую профессию. Именно тогда сменяли вывеску «кафедра туберкулеза» на кафедру «фтизиопульмонологии». Однако с начала 90-х годов в России, да и во многих странах мира туберкулез вновь стал проблемой (Хоменко А.Г., 1996).
В настоящее время уровень заболеваемости туберкулезом в России в 10 раз выше, чем в странах Западной Европы, а осужденных - в 62 раза превышает среднероссийский показатель (более 4 тысяч случаев на 100 тысяч в 1999), смертность — в 28 раз. По сравнению с 1991 годом смертность в Российской Федерации возросла более чем в 2 раза (Коломиец В.М., 2001; Шилова М.В., 2001; Holmes C.B., Hausler H, Naunn P., 1998).
Микобактерии туберкулеза поражают любую ткань и могут находится в организме в 3-х состояниях: внеклеточное - метаболически активные, внутриклеточные - малоактивные и локализованные в казеозных массах.
Как инфекционное заболевание туберкулез является наиболее используемой моделью в иммунологии и аллергологии. Почти нет теоретической проблемы иммунологии, при изучении которой не использовали бы микобактерии туберкулеза, туберкулин, вакцину БЦЖ (Авербах М.М., 1976; Адо В.А., 1985; Литвинов В.И., 1974; Фрадкин В.А., 1990; Bernstein I.L., 1996; Asselinean I., Lederez E., 1991).
В настоящее время пока нет достоверных сведений о том, какие компоненты (белки, липиды, полисахариды, нуклеиновые кислоты) индуцируют протективныи эффект (Райк Э., 1966; Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 2000; Змушко Е.И. и др., 2001; Duros R. Y., 1945). Однако очевидно, что для определения защитного эффекта важны адъювантное действие микобактерий и длительное персистирование иммуногенных антигенов в организме (Тогунова А.И. Жулина Л.В., 1972; Литвинов В.И. и др. 1996).
Живая вакцина БЦЖ была получена А. Кальметтом и Ш. Гереном в 1919 году путем аттенуации вирулентных свойств микобактерий туберкулеза бычьего вида, выделенного в 1902 году Нокардом, после 230 кратного пересева в течение 13 лет на глицериновый картофель с желчью. С 1921 года вакцина БЦЖ в течение 35 лет применялась орально, а затем внутрикожно и является обязательной к применению в 64 странах мира и рекомендована в 118 государствах (Авербах М.М. Литвинов В.И., 1970; Таточенко В.К., Озерецковский H.A., 2001; Д.Т. Леви и др. 1999; Calmett А, 1937).
Одним из критериев оценки качества вакцинных препаратов является уровень их иммунологической активности, т.е. способность вызывать выработку специфических антител. В то же время методика серологической оценки иммунологической эффективности не применима к вакцинам ряда инфекций (бруцеллез, туляремия, туберкулез), в патогенезе которых ведущая роль принадлежит клеточному иммунитету. Иммунологическая эффективность таких вакцин может оцениваться по профилактической эффективности и проявлению клеточного иммунитета или путем постановки кожно-аллергических проб (Медуницын Н.В., 2001; Бектимиров Т.А. и др., 2001). В настоящее время продолжаются исследования по получению и применению противотуберкулезных протективных препаратов типа анатоксина, так как при других болезнях аналогичными препаратами достигнуты весомые результаты (Воробьев A.A., 1999; Костина З.И., 1993; Райкис Б.Н. Воронкин Н.И., 1987; Иллютович H.A., 1983; Ramon G, 1957).
На протяжении последнего десятилетия происходит поиск вакцин новых поколений (Еремеев В.В., 2001). Проблема патологии туберкулеза и приобретенного иммунодефицита поставила вопрос о целевой разработке иммуностимулирующих препаратов, и с этой целью в мире предлагается для исследований до 600 новых веществ в качестве иммуномодуляторов (Чучалин А.Г., 2000).
Исходя из вышеизложенного следует, что одним из направлений является поиск иммуногенных и протективных антигенов из микобактерий с целью производства на их основе технологически выгодных и экологически безопасных эффективных биопрепаратов для специфической профилактики и лечения туберкулеза.
Цель и задачи исследований. Целью предпринятого исследования явилось изыскание оптимальных способов получения туберкулезных токсино-аллергенов и их детоксикации и инктивации для изготовления и применения специфических протективных биопрепаратов против туберкулеза.
Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Разработать питательные среды для выделения и выращивания микобактерий туберкулеза (МБТ) при получении туберкулезных токсино-аллергенов.
2. Определить оптимальный способ деструкции МБТ, детоксикации и инактивации формалином туберкулезных токсино-аллергенов.
3. Разработать рациональный и экологически безопасный способ получения туберкулезного анатоксина.
4. Изучить иммуногенные и протективные свойства туберкулезного анатоксина.
Научная новизна работы. Определены общие закономерности подбора химических ингредиентов жидких синтетических питательных сред для выращивания микобактерий туберкулеза при изготовлении протектив-ного биопрепарата. Выявленная устойчивость продуктов деструкции микобактерий туберкулеза к термическому воздействию позволила использовать водно-термическую обработку микроорганизмов для получения водорастворимых молекулярных токсино-аллергенов, а в последующем научно обосновать возможность их детоксикации и инактивации 0,8 % раствором формальдегида в два этапа при изготовлении анатоксина и использовать разработанную иммуноаллергическую модель (сенсибилизированных морских свинок) для контроля процесса детоксикации и инактивации формалином токсино-аллергенов.
Установленная иммунопротективная активность туберкулезного анатоксина к заражению микобактериями туберкулеза на морских свинках и кроликах позволила определить оптимальную дозу 2-3 мг на одно животное и сроки двукратной вакцинации с интервалом 14-21 день и ревакцинацию через 7-8 месяцев на фоне кратковременной в течение 3-5 месяцев чувствительности животных к туберкулину.
Практическая ценность работы. Разработан и апробирован состав и способ приготовления жидкой синтетической среды для оптимального выращивания микобактерий туберкулеза, а также использование ее состава в качестве плотной минеральной агаровой среды. На предложенной синтетической среде с лимонной кислотой, аспарагином и гликоколом возможно получить максимальный рост микобактерий туберкулеза в течение 50-55 дней с общим накоплением сухой бакмассы до 12,6 ±1,0 г/л.
Разработанная технология изготовления туберкулезного анатоксина путем детоксикации и инактивации токсино-аллергенов формалином в два этапа с последующей сорбцией на гидроокиси алюминия позволяет получить высокоэффективный протективный биопрепарат по экономически выгодной и экологически безопасной технологии.
Апробация работы. Основные материалы доложены и обсуждены на итоговой научной сессии Курского государственного медицинского университета, 1997; юбилейной конференции, посвященной 100-летию биологической промышленности. Курск, 1996; научной конференции Курской СХА, Курск, 2002; международных конференциях Одесса, 1999 и С-Петербург, 2004.
Публикации. По результатам исследований опубликовано 11 печатных работ, получен патент на «Способ получения туберкулезного анатоксина» № 2161984 бюл. № 2 от 20.01.2001 г.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Результаты разработок оптимального состава плотной и жидкой синтетической питательной среды для выделения и выращивания микобактерий туберкулеза с целью получения туберкулезных эндотоксино-аллергенов;
2. Способы деструкции микобактерий туберкулеза, детоксикации и инактивации формалином туберкулезных токсино-аллергенов;
3. Материалы изыскания рационального и экологически безопасного способа получения туберкулезного анатоксина;
4. Обоснование иммуногенных и протективных свойств туберкулезного анатоксина.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АФК — активированные формы кислорода.
ПОЛ - процесс оксидации липидов.
АОЗ - антиоксидантная защита.
МБТ - микобактерии туберкулеза.
АМ - альвеолярные макрофаги.
СОД - супероксиддисмутаза.
МДА — малоновый диальдегид.
ПЧЗТ - повышенная чувствительность замедленного типа.
ППД — протеин пурифида дереват (очищенный туберкулин).
БЦЖ - бактерии кальмета - Герена).
УЗД - ультразвуковой дезинтегратор.
ПАВ - поверхностно-активные вещества.
МПБ - мясопептонный бульон.
МПА - мясопептонный агар.
СПС - синтетическая питательная среда.
ТЕ и МБ - туберкулиновые и международные единицы.
